کلونینگ و بیان پروتئین نوترکیب vp۲ پارو ویروس سگی در دو سیستم باکتریایی و پروکاریوتی بدون سلول
نویسندگان
چکیده
زمینه و هدف: اهمیت پروتئین vp2 پاروویروس سگی در اتصال به سلولهای سرطانی انسانی و کیتهای تشخیصی دامپزشکی سبب شده تا مطالعات گستردهای در زمینه تولید این پروتئین صورت گیرد. هدف از انجام این پژوهش کلونینگ و تایید بیان پروتئین پوششی vp2 پاروویروس سگی در سیستم پروکاریوتی و بهینه نمودن بیان پروتئین vp2 در سیستم منحصر به فرد پروکاریوتی بدون سلول میباشد. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، پلاسمید pet-21a vp2 با کلون کردن محصول pcr ژن vp2 پاروویروس سگی در پلاسمید بیانی pet-21a ساخته شد. توالی کلون شده ابتدا با روش کلونی pcr ارزیابی شده، سپس توسط هضم آنزیمی و توالی یابی مورد بررسی قرار گرفت. به منظور تولید پروتئین vp2 پلاسمید pet-21a vp2 در باکتری e.coli سویه روزتا rosetta(de3) منتقل و بیان این پروتئین توسط iptg القاء گردید. پروتئین تولید شده در هر دو شرایط باکتریایی و بدون سلول توسط تکنیک sds page بررسی گردید و در نهایت به وسیله آنتی بادی منوکلونال علیه vp2 توسط تکنیک وسترن بلات ارزیابی گردید. یافتهها: کلونینگ صحیح ژن vp2 با هضم آنزیمی و تعیین توالی قطعه کلون شده به اثبات رسید. بیان پروتئین vp2 در دو سیستم باکتریایی و بدون سلول توسط sds page تایید شده و در نهایت پروتئین vp2 به وسیله وسترن بلات تایید گردید. نتیجهگیری: نتایج این تحقیق نشان داد، ژن vp2 در طی مراحل کلونینگ تکثیر شده و به خوبی در وکتور مورد نظر کلون گردیده است و بیان پروتئین در هر دو سیستم باکتریایی و بدون سلول به طور کامل مورد تایید قرار گرفته است.
منابع مشابه
کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی
زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن ta...
متن کاملکلونینگ و بیان پروتئین tat ویروس hiv1 در سیستم پروکاریوتی
ژن tat hiv-1 پروتئینی kda16-14 را کد می کند و همانطور که از نام آن پیداست فعال کننده اصلی در رونویسی hiv1 است. پروتئین tat حاوی 101 اسید آمینه است که توسط 2 اگزون کد می شود و در مراحل اولیه عفونت ویروسی بیان می شود. tatیک پروتئین متصل شونده به rna است که رونویسی را در سطح طویل سازی rna تنظیم می کندبرای این منظور ، یک پلاسمید حاوی ژن tat (puc57-tat) ساخته شد. سپس ژنtat توسط آنزیم های xho1 و ncoi...
کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی
زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pilA) از سویه PAO1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله PCR جدا گردید و در وکتور بیانی pET-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت....
متن کاملکلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD
Background and purpose: Staphylococcus aureus is an important nosocomial pathogen which causes some diseases such as endocarditis, osteomyelitis, pneumonia, toxic shock syndrome, and food poisoning. The excessive and inappropriate use of antibiotics in the treatment of these diseases causes resistance to many antibiotics. Lysostaphin is an effective agent in the treatment of staphylococcal infe...
متن کاملساخت ذرات شبه ویروسی پاروویروس سگی در سیستم پروکاریوتی بدون سلول
پارو ویروس سگیcanine parvovirus متعلق به جنس پاروویروس های غیر وابستهautonomous) (parvovirus می باشد که بطور طبیعی باعث بیماری در سگها می شود. این ویروس از جمله ویروسهایی است که پروتئینهای سطحی آن توانایی تجمع خودبخودی در غیاب ژنوم ویروسی و تشکیل ذرات شبه ویروسی را دارد. کپسید پارو ویروس سگی از سه پروتئین vp1، vp2 و vp3 درست شده است که پروتئین vp2 بخش اصلی کپسید ویروس و لیگاندهای اتصال و ورود ب...
15 صفحه اولکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن
Background and purpose: Measurement of thyroid stimulating hormone (TSH), usually through RIA and ELISA tests, is very useful for the diagnosis of thyroid disorders. Considering the structural similarity between alpha chain of TSH and the three glycoprotein hormones of luteinizing hormone, follicle stimulating hormone, and chorionic gonadotropin (CG), in this study, we aimed to examine the prod...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی اراکجلد ۱۵، شماره ۱۰، صفحات ۴۳-۵۳
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023